Niveles de óxido nítrico en monos Macacus irus inoculados con virus dengue / Serum nitric oxide in Macacus irus monkeys inoculated with dengue virus

Objetivo: partiendo de que los anticuerpos preexistentes en la infección secundaria por dengue suprimen la acción de moléculas con acciones antivirales como el óxido nítrico, se determinó el comportamiento de esa molécula en suero de monos Macacus irus inoculados con virus dengue 2 como infección primaria y en monos con una infección secuencial dengue 4-dengue2. Métodos: los niveles de óxido nítrico referidos como niveles de nitritos fueron detectados mediante la reacción de Griess. Resultados: los niveles máximos de óxido nítrico se detectaron en los animales que sufrieron una infección primaria a partir del séptimo día posinoculación, a diferencia de los monos con infección secundaria en que no se obtuvieron niveles mayores de 100 µM. Conclusiones: al parecer existe una asociación entre la infección secundaria y la inhibición de la producción del óxido nítrico.

Objective: To determine the action of nitric Oxide (NO) in serum samples of dengue 2 inoculated Macacus irus monkeys as primary infection and in dengue 4 -dengue 2 inoculated monkeys as secondary infection, taking into account that preexisting antibodies in secondary dengue infection elicit the action of antiviral molecules such as nitric oxide. Methods: NO levels referred as nitrite levels were detected by Griess colorimetric reaction. Results: The highest nitric oxide levels were detected in those animals with primary infection seven days after inoculation monkeys whereas those monkeys with secondary infection did not show NO levels over 100 µM. Conclusions: Our results suggest that there seems to be a relationship between secondary infection and NO production inhibition.

Comportamiento biológico de 3 cepas del virus dengue-2 en 2 líneas celulares de mosquitos / Biological behavior of 3 strains of the dengue-2 virus in 2 cell lines of mosquitoes

Strains A-15 (isolated in Cuba, 1981), Jamaica (isolated in Jamaica, 1981) and Nueva Guinea "C" (standard) from dengue-2 virus were compared according to the time of appearance of the cytopathic effect (CPE), to the time of appearance of specific fluorescence and to the kynetics of viral multiplication on being innoculated in the cell lines AP-61 (Aedes pseudoscutellaris) and C6/36 HT (Aedes albopictus). The results showed that the CPE of highest intensity and earliest appearance was for A-15, followed by Jamaica and Nueva Guinea "C" (NGC). AP-61 seems to favor the CPE of Jamaica with respect to that of the same strain in C6/36 HT. The fluorescence was earlier for Jamaica and A-15 and more intensive for the latter, whereas NGC manifested late. This behaviour was similar in the 2 cellular systems. The greatest titres during the kinetics of viral multiplication were obtained from A-15 in both lines, although in AP-61 they tend to be equal from the 4th day on. The strain A-15 showed a particular behaviour of these biological properties on comparing them with the other strains under study, which may be related to changes found in its neucleotide sequence.

Estudio de algunas propiedades biológicas de 3 cepas de dengue 2 con diferencias en sus secuencias nucleotídicas / Study of various biological properties of 3 strains of dengue 2 with differences in their nucleotide sequences

Some biological properties of Dengue-2 strains such as A-15 (isolated in Cuba in 1981); Jamaica (isolated in Jamaica in 1981) and New Guinea "C" (NG"C") standard strain differing in their nucleotide sequences were studied. The results showed that the cytopathic effect in C6/36 HT cell line occurred earlier in A-15 strain and that fluorescence was first detected in Jamaica and A-15 strains. This seems to indicate that rapid detection of strains does not have any relation to neither their history of passage nor the original isolation system. A-15 and NG"C" strains exhibited an heterogeneous pattern formed by big and small plaques but average size of plaques in NG"C" was lower whereas Jamaica showed only small plaques. The most neurovirulent strain in mice was NG"G" followed by A-15 whereas Jamaica was not neurovirulent at all. These results indicate that A-15 has a different biological behaviour which is probably due to intrinsic differences. It should be taken into account that 7 amino acid changes were found in the envelope protein which may have affected the expression of some biological properties.

Reacción en cadena de la polimerasa para la detección rápida y determinación del serotipo de virus del dengue en muestras clínicas / Polymerase chain reaction for rapid detection and serotyping of dengue viruses in clinical samples

El trabajo que aquí se presenta describe las ventajas de usar la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RCP-TI) para detectar e identificar con rapidez virus del dengue en muestras clínicas. Se sometieron directamente a RCP-TI 27 muestras obtenidas de pacientes con fiebre de dengue y fiebre hemorrágica de dengue durante epidemias en Colombia, Nicaragua y Panamá. El ADN de cadena doble obtenido con la RCP-TI se identificó mediante una segunda amplificación (RCP de anidación) utilizando cebadores específicos para cada tipo de virus, aislamiento vírico e inmunofluorescencia indirecta (IFI) y con electroinmunoensayo enzimático detector de anticuerpos IgM contra el virus del dengue. El genoma vírico amplificado se detectó e identificó en un máximo de 8 horas. Los parámetros calculados para hacer el diagnóstico por RCP-TI, usando el aislamiento vírico y la IFI como estándar de oro, fueron una sensibilidad de 100%; una especificidad de 78%; un valor predictivo positivo de 69% y un valor predictivo negativo de 100%. Cabe notar que dos de los especímenes que dieron resultados positivos a la prueba de RCP-TI anidada y negativos al aislamiento vírico mostraron anticuerpos específicos de tipo IgM. Los resultados de la RCP-TI en general mostraron una estrecha concordancia con los del aislamiento vírico, lo cual sugiere que la RCP es un procedimiento que facilita enormemente el diagnóstico rápido y temprano del dengue.

This study describes the benefits of using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for the rapid detection and typing of dengue virus in clinical samples. Twenty-seven serum specimens from patients with dengue fever and dengue hemorrhagic fever in Colombia, Nicaragua, and Panama were directly subjected to RT-PCR for the detection of dengue virus. The resulting double-stranded DNA product was typed by a second round of PCR amplification (nested PCR) with type specific primers, viral culture/indirect immunofluorescence (IIF), and enzyme-linked electroimmunoassay for IgM anti-dengue antibodies. The amplified virus genome was detected and typed within 8 hours. Nested RT-PCR, using viral culture and IIF as the gold standard, showed 100% sensitivity; 78% specificity; 69% positive predictive value, and 100% negative predictive value. It is noteworthy that two of the specimens whose results were positive with nested RT-PCR and negative with viral culture showed specific IgM antibodies. The results of the RT-PCR were in close agreement with those obtained through viral culture. This suggests PCR can greatly facilitate the rapid and early diagnosis of dengue infection.

Diagnóstico virológico de un brote de fiebre y rash producido por Parvovirus B19, Cuba, 1995 / Virologycal diagnosis of an aoutbreak of fever and rash caused by Parvovirus B19, Cuba, 1995

Se reportan los resultados obtenidos en el estudio de un brote de fiebre y rash ocurrido en Ciudad de La Habana en marzo de 1995. En las muestras de 35 pacientes se descartaron dengue, sarampión, rubéola, herpes simple y Epstein Barr como agentes causales del brote. Mediante la detección de anticuerpos IgM y la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (RCP) se identificó al Parvovirus B19 como agente causal del brote. En 14/18 muestras (77,7 por ciento) se comprobó la infección por este agente por alguna de las técnicas empleadas. Este estudio se refiere al primer brote confirmado de Parvovirus B19 en Cuba

Identificacion por ELISA de agentes productores de efecto citopatico ligero aislados durante la epidemia de neuropatia en Cuba, 1991 / Identification by ELISA of light cytopathic effect-producin agents isolated during the neuropathy epidemy in cuba, 1991

Utilizando como referencia la cepa 44/93 aislada durante la epidemia de neuropatia en Cuba en 1991 y caracterizada como productora en cultivo celular de efecto citopatico ligero (ECP-L), se logro la normalizacion de un ELISA para la identificacion rapida de otras cepas con similar efecto. El ensayo consistio en un ELISA tipo sandwich donde las condiciones seleccionadas para cada reactivo (10 g/mL para el anticuerpo de recubrimiento, 1 mg/mL para el antigeno y dilucion 1/2 000 para el conjugado) permitieron una adecuada discriminacion entre el antigeno y el control de antigeno para la cepa de referencia empleada. La evolucion de un papel de cepas virales de referencia y de otras cepas productoras de ECP-L, mostro un 100 por ciento de coincidencia entre este metodo y el aislamiento en cultivo celular. Los resultados obtenidos nos permiten recomendar la utilizacion de este ensayo como una alternativa mas precisa en la identificacion de estos agentes

Caracterizacion fisico-quimica de los agentes aislados durante el brote de neuropatia epidemica en Cuba. Parte I / Physical and chemical characterization of isolated agents during the outbreak of epidemic neuropathy in Cuba. Part I

En el presente trabajo se reportan las caracteristicas fisico-quimicas presentadas por los agentes aislados con muestras de pacientes con neuropatia epidemica. Los Enterovirus aislados se comportaron en la forma descrita para estos virus. Los agentes productores de efecto citopatico ligero (ECP-L) se comportaron en forma variable en lo que se refiere a la sensibilidad al cloroformo, por otra parte no fueron sensibles al acido fosfonoacetico (PAA) ni al cloruro de guanidina (GHCl) y crecieron en celulas previamente tratadas con bromodeoxiuridina (BDUR). Estos resultaron sugirieron la presencia de 2 agentes que recuerdan a los Enterovirus y a virus envueltos. Se necesita continuar profundizando en los estudios de caracterizacion de estos agentes

Caracterizacion fisico-quimica de los agentes aislados durante el brote de neuropatia epidemica en Cuba. Parte II / Physical and chemical characterization of isolated agents during the outbreak of epidemic neuropathy in Cuba. Part II

En el presente estudio se demuestra la presencia de 2 agentes con caracteristicas culturales diferentes, tanto de una cepa de Cox A9, como en una productora de efecto citopatogenico ligero (ECP-L), ambas aisladas de pacientes con neuropatia epidemica. Mediante neutralizacion del Cox A9 con un suero hiperinmune homologo se desarrollo en la dilucion 10 a la 4 un ECP-L que se propago en pases sucesivos. Se realizo un gradiente de sacarosa a una cepa productora de ECP-L, y de una de las fracciones pasada en el cultivo de tejido en presencia de acido fosfonoacetico (PAA) se desarrollo en ECP tipico de Enterovirus. Se discute el posible rol patogenico de estos

Factores que influyen en el crecimiento del agente productor del efecto citopatico ligero aislado en pacientes con neuropatia epidemica / Factors influencing upon the growth of the mild cytopathogenic effect producing agent isolated from patients presenting with epidemic neuropathy

En el presente reporte se describen algunos factores que influyen en el crecimiento del agente productor del efecto citopatico (ECP) ligero aislado a partir de liquido cefalorraquideo de pacientes de neuropatia epidemica. Se demostro que la concentracion de NaHCO3 fue decisiva para la apariciondel ECP. Concentraciones determinadas de MnCL2 permitiron la visualizacion del ECP e incrementaron ekl rendimiento viral

Normalizacion del metodo de placas para los virus aislados en pacientes con neuropatia epidemica / Normalization of the plaque method for viruses isolated from patients presenting with epidemic neuropathy

En el presente reporte se presentan las condiciones necesarias para el desarrollo de placas en los agentes productores de efecto citopatico ligero que fueron aislados de muestras de liquido cefalorraquideo de pacientes con neuropatia epidemica